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第十一期:這項(xiàng)技術(shù),讓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)更容易、更持久!

時(shí)間:2021-03-10        來(lái)源:

人類對(duì)生命的探索從未止步。


細(xì)胞,作為人體結(jié)構(gòu)和生理功能的基本單位,是探索生命體的重要實(shí)驗(yàn)對(duì)象。通過(guò)對(duì)小小的細(xì)胞進(jìn)行研究,人們得以窺見(jiàn)生物的大世界。



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每天,都有無(wú)數(shù)細(xì)胞參與到科研中,可是,那么多的細(xì)胞從哪兒來(lái)呢?


答案是:通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)。



不論是對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō),細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程。


科學(xué)家們利用細(xì)胞的“生長(zhǎng)繁殖”功能,能夠培育出成千上萬(wàn)的細(xì)胞,他們被裝在試驗(yàn)器皿中,隨時(shí)為實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備著。


細(xì)胞培養(yǎng),是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的前提與基礎(chǔ),如果沒(méi)有足夠多的細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,科學(xué)家恐怕也是“巧婦難為無(wú)米之炊”!


01

細(xì)胞貼壁是怎么一回事?


其實(shí),培育細(xì)胞跟培育樹(shù)苗有著異曲同工之處:


一粒種子,長(zhǎng)成大樹(shù),如果我們想要得到更多樹(shù)苗,我們可以通過(guò)移植來(lái)獲得小樹(shù)苗;


一個(gè)細(xì)胞,繁殖出了很多細(xì)胞,可是許多細(xì)胞的繁殖是有時(shí)間周期和上限的,如果我們想得到更多生命力旺盛的細(xì)胞,就可以通過(guò)傳代培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn):


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將培養(yǎng)物分割成許多小部分,重新接種到另外的培養(yǎng)器皿中,在進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程,就叫細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。


而代傳的方法則包括:懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代、半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代(Hela細(xì)胞)和貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代。


看到這里,你便知道,細(xì)胞貼壁是什么意思了,原來(lái),細(xì)胞貼壁是培育細(xì)胞的一種方法。


02

細(xì)胞培養(yǎng)耗材“眾口難調(diào)”


當(dāng)我們把細(xì)胞分割成許多小部分時(shí),就需要給它們找“新家”,以此作為它們繁殖生長(zhǎng)的“落腳點(diǎn)”。


在實(shí)驗(yàn)室中,科學(xué)家通過(guò)板、瓶、皿等容器來(lái)給細(xì)胞們“安家”,可以說(shuō)這些器材,是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的“伊甸園”,是實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的消耗品。


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由于細(xì)胞種類眾多,環(huán)境適應(yīng)能力各異,研究者的需求也不盡相同,所以細(xì)胞培養(yǎng)器皿的功能可謂“眾口難調(diào)”。


比如,對(duì)于淋巴細(xì)胞、人白血病細(xì)胞K-562等懸浮細(xì)胞培養(yǎng)而言,普通的聚苯乙烯基材器皿即可滿足條件;


但是,對(duì)于成纖維型細(xì)胞、上皮型細(xì)胞等貼壁細(xì)胞培養(yǎng)而言,則需要對(duì)基材進(jìn)行親水表面處理,以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)。


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也許你會(huì)問(wèn),難道用普通的器皿,細(xì)胞就不能貼壁生長(zhǎng)了嗎?


事實(shí)的確是這樣,許多動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),往往需要錨定在某種特殊的表面介質(zhì),包括細(xì)胞外基質(zhì)提取物、多肽,及經(jīng)過(guò)特殊處理的塑料、玻璃表面等,才能長(zhǎng)效生長(zhǎng);


很多普通器材,不能滿足細(xì)胞貼壁的條件,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞停止分裂,甚至死亡。


03

等離子體表面改性技術(shù)

讓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)更高效


要讓細(xì)胞更好的“貼壁”,一直以來(lái)都是一個(gè)需要解決的問(wèn)題。


由于我國(guó)生命科學(xué)領(lǐng)域研究相對(duì)歐美國(guó)家起步較晚,高端生物培養(yǎng)用塑料耗材主要依賴進(jìn)口,包括美國(guó)康寧、賽默飛世爾在內(nèi)的行業(yè)巨頭,占領(lǐng)了近95%的市場(chǎng)份額。


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尤其是在半貼壁細(xì)胞及干細(xì)胞等難養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)等高端應(yīng)用領(lǐng)域,國(guó)內(nèi)的大部分企業(yè)僅能生產(chǎn)普通親水系列的產(chǎn)品,長(zhǎng)效超親水的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品基本依賴進(jìn)口。


但是,武漢先進(jìn)院前瞻研發(fā)中心等離子體項(xiàng)目研發(fā)團(tuán)隊(duì),通過(guò)自主研發(fā)的等離子體增強(qiáng)親水改性技術(shù),實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞的超貼壁培養(yǎng)。


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這一技術(shù)的原理是:通過(guò)團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)的射頻等離子體設(shè)備與處理工藝,使聚苯乙烯表面的水接觸角由原先的90°降至10°以下。


【趣味科普】第三期:超疏水材料,出淤泥而不染 一文中,我們?cè)敿?xì)解釋過(guò)接觸角的概念,感興趣的朋友可點(diǎn)擊查閱。


簡(jiǎn)而言之:接觸角越小,細(xì)胞與器皿的貼壁越緊密。


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在顯微鏡的觀察下,未處理的培養(yǎng)皿會(huì)發(fā)生明顯的細(xì)胞成團(tuán)現(xiàn)象,而經(jīng)增強(qiáng)親水處理后的培養(yǎng)皿能有效促進(jìn)細(xì)胞在其表面的粘附。


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293t細(xì)胞培養(yǎng)24h后的顯微鏡下對(duì)比圖:(a) 未經(jīng)表面處理的培養(yǎng)皿;(b)增強(qiáng)親水處理后的培養(yǎng)皿


經(jīng)過(guò)這一等離子體增強(qiáng)親水技術(shù)處理的實(shí)驗(yàn)器皿,接觸角小于10°、在模擬環(huán)境下親水時(shí)間可達(dá)12個(gè)月以上,部分指標(biāo)可以對(duì)標(biāo)賽默飛世爾的超親水培養(yǎng)系列產(chǎn)品,用國(guó)產(chǎn)技術(shù)替代進(jìn)口產(chǎn)品并非夢(mèng)想。


生命探索永不止步,愿所有科學(xué)家都能用上國(guó)產(chǎn)實(shí)驗(yàn)器皿,進(jìn)行超親水細(xì)胞超貼壁培養(yǎng);“巧婦有米”,科研大餐指日可待!



參考文獻(xiàn):

[1]劉梅芳,徐國(guó)恒, 細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)為什么會(huì)貼到培養(yǎng)皿壁上。生物學(xué)通報(bào)。2007,42(9):54。

[2]吳建波,尹麗慧, 不同培養(yǎng)方法對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁和純度的影響。山東醫(yī)藥,2008,48(4):15-17。

[3]韓巖, 基膜黏連蛋白和Ⅳ型膠原對(duì)培養(yǎng)許旺細(xì)胞貼壁及增殖的作用。中華顯微外科雜志。2002 , 25(3):194-196。

[4]朱壬葆,人骨髓體外培養(yǎng)中貼壁細(xì)胞層的形態(tài)分析。實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào),1982(2):33-43。

[5]季紅,劉永,趙林普,小鼠骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)中貼壁細(xì)胞層的結(jié)構(gòu)與作用。中國(guó)病理生理雜志, 1988(01)。

[6]陳桑,劉希鳳,凌茂英,介紹一種使懸浮的肝癌細(xì)胞貼壁的方法。大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 1992(4):61-62。


 

原創(chuàng):吳金娥 葉凱

科研指導(dǎo):葉凱 高明




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